今早，我公司吳收到由沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)朱老師發(fā)來(lái)的會(huì)話。朱老師在2015年連續(xù)購(gòu)買了6次ELISA試劑盒，上周，朱老師我司技術(shù)說(shuō)想要試試自己配的試劑盒，看看檢測(cè)效果。在朱老師給吳的會(huì)話中表示：“我的這個(gè)檢測(cè)結(jié)果不理想，不知道是哪里出了問(wèn)題。幫我看下是什么原因可以嗎？”我公司試劑盒售后客服吳說(shuō)可以，并為朱老師安排技術(shù)解析Elisa測(cè)定結(jié)果。
    朱老師的主要問(wèn)題是：我自己合成8個(gè)氨基酸的抗原短肽，和BSA耦連后免疫動(dòng)物，1個(gè)月后用ELISA測(cè)定血清中針對(duì)抗原短肽的抗體滴度，具體步驟：用碳酸緩沖液溶解抗原短肽后包板，4度冰箱18小時(shí)，再用1%OVA37度封閉2小時(shí)，洗板3次。待測(cè)血清用10%小牛血清倍比稀釋，37度溫育1小時(shí)，洗板3次，加入二抗，37度溫育40分鐘，洗板3次，加TMB顯色，結(jié)果比較詭異，陰性對(duì)照也顯色了，且OD值和陽(yáng)性差別不大。是什么原因呢？是洗板的問(wèn)題嗎？ 
    十分鐘后，技術(shù)員給朱老師去解答。可以根據(jù)這幾個(gè)方面分析： 
1.洗板是否串孔，如串孔的話可能造成污染;你一抗、二抗每次洗板時(shí)洗5遍以上。
2.封閉液的問(wèn)題，你說(shuō)陰性對(duì)照也顯色了，那zui主要的問(wèn)題應(yīng)該是封閉，應(yīng)重新考慮用OVA封閉是否適合，如果OVA封閉效果不好的話可以選擇其他的封閉液。封閉液的選擇園子里有很多相關(guān)的帖，你搜一下看看。
3.建議ELISA試劑盒包被在37度兩小時(shí)，這樣的效果可能會(huì)好一些。
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