人抗呼吸道合胞病毒抗體ELISA試劑盒顯色重要性及樣品處理
更新時間：2013-05-07 點擊次數(shù)：1883
人抗呼吸道合胞病毒抗體ELISA試劑盒顯色的重要性
顯色是ELISA中的zui后一步溫育反應，此時酶催化無色的底物有色的產物。反應的溫度和時間仍是影響顯色的因素。在一定時間內，陰性孔可保持無色，而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強。適當提高溫度有助于加速顯色進行。在定量測定中，加入底物后的反應溫度和時間應按規(guī)定力求準確。定性測定的顯色可在室溫進行，時間一般不需要嚴格控制，有時可根據(jù)陽性對照孔和陰性對照孔的顯色情況適當縮短或延長反應時間，及時判斷。 OPD底物顯色一般在室外溫或37℃反應20-30分鐘后即不再加深，再延長反應時間，可使本底值增高。OPD底物液受光照會自行變色，顯色反應應避光進行，顯色反應結束時加入終止液終止反應。OPD產物用酸終止后，顯色由橙黃色轉向棕黃色。
TMB受光照的影響不大，可在室溫中置于操作臺上，邊反應觀察結果。但為保證實驗結果的穩(wěn)定性，宜在規(guī)定的適當時間閱讀結果。TMB經HRP作用后，約40分鐘顯色達，隨即逐漸減弱，至2小時后即可*消退至無色。TMB的終止液有多種，疊氮鈉和SDS等酶抑制劑均可使反應終止。這類終止劑尚能使藍色維持較長時間（12-24小時）不褪，是目視判斷的良好終止劑。此外，各類酸性終止液則會使藍色轉變成黃色，此時可用特定的波長（450nm）測讀吸光值。
人抗呼吸道合胞病毒抗體ELISA試劑盒檢測中樣品的處理
1．細胞培養(yǎng)物上清：
細胞培養(yǎng)物于室溫1000g，離心10分鐘后收集上清，并將標本保存于-20℃，且應避免反復凍融。
2．血清：
標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g，4℃離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。
3．血漿：
可用EDTA或肝素作為抗凝劑標本采集后30分鐘內于2-8℃,1000g離心15分鐘，或將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。
4．尿液：
無菌收集取初尿，離心除去沉淀物，即可用于檢測，要長期保存尿樣，可以加入0.05％的NaN3在4-8℃保存，或加入尿樣冰凍保護液放入-20℃冰箱長期保存。
5．組織勻漿：
將組織標本先用PBS洗滌，除去多余血液，勻漿化后放在PBS于-20℃放置過夜，再經過二次反復凍融破膜，5000g，4℃離心5分鐘，取上清即可檢測。
注：取樣和樣品處理過程中，防止有毒物質對操作人員的危害，要采取相應的保護措施。
