我們知道，ELISA測定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術要求，在臨床檢驗中除正常反應外，有時常可見到一些錯誤結果(即假陽性或假陰性)，那么致使實驗不成功的主要原因有哪些咧？下面我們一起來看看上海恒遠恒遠生物科技有限公司為大家推薦的技術，本周焦點：ELISA實驗操作失敗的主要原因。
   

*，標本的影響：溶血標本及混有紅細胞的血清采用ELISA法檢測易產生假陽性。可能是溶血血清中含有過氧化酶物質(紅細胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素)，在洗滌過程中往往難以*洗脫，它可使H2O2釋放出原生態(tài)氧(O)，從而催化底物四甲基聯苯胺可溶性的有色物質，即顯藍色，產生假陽性。所以嚴重溶血標本禁用。
   

第二，標本受細菌污染：因菌體中可能含有內源性辣根過氧化物酶，因此，被細菌污染的標本同溶血標本一樣，亦可產生非特異性顯色而干擾測定結果。
   

第三，標本保存不當：在冰箱中保存過久的標本，在間接法ELISA測定中會導致本底過深、造成假陽性；為克服上述干擾，ELISA試劑盒測定的血清標本宜為新鮮采集；如不能立即測定，5d內測定的血清標本可存放于4℃，1周后測定的血清標本應低溫凍存；凍存后融解的標本，蛋白質局部濃縮，分布不均，應充分混合后再測定，但混勻時應輕柔，不可強烈振蕩。
   

第四，標本凝固不全：在工作中，有時為了爭取時間快速檢測，常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血清，使血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性結果；因此血液標本采集后必須使其充分凝固后再分離血清。
   

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